د ایډز ایجپټي (ډیپټیرا: کولیسیډی) په وړاندې د لاروا وژونکي او بالغ درملنې په توګه د نباتي اړینو غوړیو پر بنسټ د ټیرپین مرکباتو ترکیب

د Nature.com د لیدلو لپاره مننه. د هغه براوزر نسخه چې تاسو یې کاروئ محدود CSS ملاتړ لري. د غوره پایلو لپاره، موږ سپارښتنه کوو چې تاسو د خپل براوزر نوې نسخه وکاروئ (یا په انټرنیټ اکسپلورر کې د مطابقت حالت غیر فعال کړئ). په عین حال کې، د دوامداره ملاتړ ډاډ ترلاسه کولو لپاره، موږ سایټ د سټایل کولو یا جاواسکریپټ پرته ښیې.
د نباتاتو څخه اخیستل شوي حشره وژونکي مرکباتو ترکیبونه ممکن د آفتونو په وړاندې همغږي یا ضد تعاملات وښيي. د ایډیز مچیو لخوا لیږدول شوي ناروغیو چټک خپریدو او دودیزو حشره وژونکو ته د ایډیز مچیو نفوس زیاتیدونکي مقاومت ته په پام سره، د ایډیز ایجپټي د لاروا او بالغ مرحلو په وړاندې د بوټو د لازمي غوړیو پر بنسټ د ټیرپین مرکباتو اته ویشت ترکیبونه جوړ او ازمول شوي. پنځه د نباتاتو اړین غوړي (EOs) په پیل کې د دوی د لاروا وژونکي او بالغانو لپاره د کارولو اغیزمنتوب لپاره ارزول شوي، او د GC-MS پایلو پراساس په هر EO کې دوه لوی مرکبات پیژندل شوي. اصلي پیژندل شوي مرکبات اخیستل شوي، لکه ډایلیل ډیسلفایډ، ډایلیل ټرای سلفایډ، کارون، لیمونین، یوجینول، میتیل یوجینول، یوکلیپټول، یوډیسمول او د مچیو الفا-پینین. د دې مرکباتو دوه اړخیز ترکیبونه بیا د فرعي وژونکي دوزونو په کارولو سره چمتو شوي او د دوی همغږي او ضد اغیزې ازمول شوي او ټاکل شوي. غوره لاروا وژونکي ترکیبونه د لیمونین سره د ډایال ډیسلفایډ مخلوط کولو سره ترلاسه کیږي، او غوره بالغ وژونکي ترکیبونه د کارون د لیمونین سره د مخلوط کولو سره ترلاسه کیږي. په سوداګریزه توګه کارول شوي مصنوعي لاروا وژونکي ټیمفوس او د لویانو درمل مالاتیون په جلا توګه او د ټیرپینایډونو سره په دوه اړخیزو ترکیبونو کې ازمول شوي. پایلو ښودلې چې د ټیمفوس او ډایال ډیسلفایډ او مالاتیون او یوډسمول ترکیب ترټولو مؤثر ترکیب و. دا قوي ترکیبونه د ایډز ایجپټي په وړاندې د کارولو وړتیا لري.
د نباتاتو اړین غوړي (EOs) ثانوي میټابولیتونه دي چې مختلف بایو اکټیو مرکبات لري او د مصنوعي آفت وژونکو د بدیل په توګه په زیاتیدونکي توګه مهم کیږي. دوی نه یوازې چاپیریال دوستانه او د کاروونکي دوستانه دي، بلکې دوی د مختلفو بایو اکټیو مرکباتو مخلوط هم دي، کوم چې د مخدره توکو د مقاومت د پراختیا احتمال هم کموي. د GC-MS ټیکنالوژۍ په کارولو سره، څیړونکو د مختلفو نباتاتو اړینو غوړیو اجزا معاینه کړل او د 17,500 خوشبويي بوټو څخه 3,000 څخه ډیر مرکبات وپیژندل، چې ډیری یې د حشراتو ضد ملکیتونو لپاره ازمول شوي او راپور شوي چې د حشراتو ضد اغیزې لري 3,4. ځینې مطالعې روښانه کوي چې د مرکب د اصلي برخې زهرجنیت د هغې د خام ایتیلین اکسایډ سره ورته یا ډیر دی. مګر د انفرادي مرکباتو کارول ممکن بیا د مقاومت پراختیا لپاره ځای پریږدي، لکه څنګه چې د کیمیاوي حشراتو ضد 5,6 قضیه ده. له همدې امله، اوسنی تمرکز د ایتیلین اکسایډ پر بنسټ مرکباتو د مخلوط چمتو کولو باندې دی ترڅو د حشراتو ضد اغیزمنتوب ښه کړي او د هدف شوي آفتونو نفوس کې د مقاومت احتمال کم کړي. په EOs کې موجود انفرادي فعال مرکبات ممکن د EO ټولیز فعالیت منعکس کولو ترکیبونو کې همغږي یا ضد اغیزې وښيي، دا حقیقت چې د پخوانیو څیړونکو لخوا ترسره شوي مطالعاتو کې ښه ټینګار شوی دی 7،8. د ویکتور کنټرول پروګرام کې EO او د هغې اجزا هم شامل دي. د اړینو تیلو د مچیو وژونکي فعالیت په پراخه کچه د کولیکس او انوفیلس مچیو په اړه مطالعه شوې. ډیری مطالعاتو هڅه کړې چې د مختلفو نباتاتو سره د سوداګریزو کارول شوي مصنوعي آفت وژونکو سره یوځای کولو سره اغیزمن آفت وژونکي رامینځته کړي ترڅو ټول زهرجنیت زیات کړي او اړخیزې اغیزې کمې کړي 9. مګر د ایډیس ایجیپټي په وړاندې د داسې مرکباتو مطالعې نادرې پاتې دي. په طبي علومو کې پرمختګ او د درملو او واکسینونو پراختیا د ځینو ویکتورونو څخه رامینځته شوي ناروغیو سره مبارزه کې مرسته کړې. مګر د ویروس د مختلفو سیروټایپونو شتون، چې د ایډیس ایجیپټي مچیو لخوا لیږدول کیږي، د واکسین کولو پروګرامونو د ناکامۍ لامل شوی. له همدې امله، کله چې دا ډول ناروغۍ رامینځته کیږي، د ویکتور کنټرول پروګرامونه د ناروغۍ د خپریدو مخنیوي لپاره یوازینۍ انتخاب دی. په اوسني حالت کې، د ایډز ایجپټي کنټرول خورا مهم دی ځکه چې دا د مختلفو ویروسونو او د هغوی د سیروټایپونو کلیدي ویکتور دی چې د ډینګي تبه، زیکا، ډینګي هیمرجیک تبه، ژیړ تبه، او داسې نورو لامل کیږي. تر ټولو د پام وړ خبره دا ده چې د نږدې ټولو ویکتورونو څخه زیږیدلي ایډز لخوا زیږیدلي ناروغیو شمیر هر کال په مصر کې مخ په زیاتیدو دی او په ټوله نړۍ کې مخ په زیاتیدو دی. له همدې امله، پدې شرایطو کې، د ایډز ایجپټي نفوس لپاره د چاپیریال دوستانه او مؤثر کنټرول اقداماتو رامینځته کولو ته بیړنۍ اړتیا ده. پدې برخه کې احتمالي نوماندان EOs، د دوی اجزا مرکبات، او د دوی ترکیبونه دي. له همدې امله، دې څیړنې هڅه وکړه چې د ایډز ایجپټي په وړاندې د پنځو نباتاتو څخه د حشراتو ضد ملکیتونو (لکه، نعناع، ​​مقدس تلسي، یوکلیپټس سپاټډ، الیوم سلفر او میلالیوکا) څخه د کلیدي نباتاتو EO مرکباتو اغیزمن همغږي ترکیبونه وپیژني.
ټولو غوره شویو EOs د Aedes aegypti په وړاندې د 24-h LC50 سره د 0.42 څخه تر 163.65 ppm پورې احتمالي لاروا وژونکي فعالیت ښودلی. د لاروا وژونکي فعالیت ترټولو لوړ د پیپرمینټ (Mp) EO لپاره ثبت شوی چې د LC50 ارزښت په 24 ساعتونو کې 0.42 ppm دی، ورپسې لہسن (As) د LC50 ارزښت په 24 ساعتونو کې 16.19 ppm دی (جدول 1).
د اوکیمم سینټم، او ایس ای او پرته، نورو ټولو څلورو سکرین شویو ای اوګانو د الرجیک اغیزې ښودلې، د LC50 ارزښتونه د 24 ساعتونو د افشا کیدو په موده کې له 23.37 څخه تر 120.16 ppm پورې وو. تیموفیلس سټریاټا (Cl) ای او د افشا کیدو په 24 ساعتونو کې د LC50 ارزښت 23.37 ppm سره د لویانو په وژلو کې خورا مؤثر و، ورپسې یوکلیپټس میکولاټا (Em) چې د LC50 ارزښت 101.91 ppm درلود (جدول 1). له بلې خوا، د او ایس لپاره د LC50 ارزښت لا تر اوسه نه دی ټاکل شوی ځکه چې د مړینې لوړه کچه 53٪ په لوړه دوز کې ثبت شوې وه (ضمیمه شکل 3).
په هر EO کې دوه لوی مرکبات د NIST کتابتون ډیټابیس پایلو، د GC کروماتگرام ساحې سلنه، او د MS سپیکٹرا پایلو (جدول 2) پراساس پیژندل شوي او غوره شوي. د EO As لپاره، اصلي مرکبات چې پیژندل شوي ډایلیل ډیسلفایډ او ډایلیل ټرای سلفایډ وو؛ د EO Mp لپاره اصلي مرکبات چې پیژندل شوي کارون او لیمونین وو، د EO Em لپاره اصلي مرکبات چې پیژندل شوي یوډیسمول او یوکلیپټول وو؛ د EO Os لپاره، اصلي مرکبات چې پیژندل شوي یوجینول او میتیل یوجینول وو، او د EO Cl لپاره، اصلي مرکبات چې پیژندل شوي یوجینول او α-پینین وو (شکل 1، ضمیمه ارقام 5-8، ضمیمه جدول 1-5).
د ټاکل شویو اړینو غوړیو د اصلي ټیرپینایډونو د ډله ایز سپیکٹرومیټري پایلې (A-ډایالیل ډیسلفایډ؛ B-ډایالیل ټرای سلفایډ؛ C-یوجینول؛ D-میتیل یوجینول؛ E-لیمونین؛ F-اروماتیک سیپرون؛ G-α-پینین؛ H-سینیول؛ R-یوډامول).
په ټولیزه توګه نهه مرکبات (ډایالل ډیسلفایډ، ډایالل ټرای سلفایډ، یوجینول، میتیل یوجینول، کارون، لیمونین، یوکلیپټول، یوډیسمول، α-پینین) د اغیزمنو مرکباتو په توګه پیژندل شوي چې د EO اصلي اجزا دي او په انفرادي ډول د لاروا په مرحلو کې د Aedes aegypti په وړاندې بایو معاینه شوي. . مرکب یوډیسمول د 24 ساعتونو تماس وروسته د 2.25 ppm LC50 ارزښت سره ترټولو لوړ لاروا وژونکي فعالیت درلود. د ډایالل ډیسلفایډ او ډایالل ټرای سلفایډ مرکبات هم د احتمالي لاروا وژونکي اغیزو لرونکي موندل شوي، د اوسط فرعي وژونکي دوزونو سره د 10-20 ppm په حد کې. د یوجینول، لیمونین او یوکلیپټول مرکبونو لپاره د لاروا وژونکي منځنۍ فعالیت بیا لیدل شوی چې د LC50 ارزښتونه 63.35 ppm، 139.29 ppm دي. او په ترتیب سره د ۲۴ ساعتونو وروسته ۱۸۱.۳۳ ppm (جدول ۳). په هرصورت، د میتیل یوجینول او کارون د لاروا وژونکو کوم مهم ظرفیت حتی په لوړ دوزونو کې هم ونه موندل شو، نو د LC50 ارزښتونه محاسبه نه شول (جدول ۳). مصنوعي لاروا وژونکي ټیمیفوس د ۲۴ ساعتونو د تماس په جریان کې د اډیس ایجیپټي په وړاندې د ۰.۴۳ ppm اوسط وژونکي غلظت درلود (جدول ۳، ضمیمه جدول ۶).
اووه مرکبات (ډایالل ډیسلفایډ، ډایالل ټرای سلفایډ، یوکلیپټول، α-پینین، یوډیسمول، لیمونین او کارون) د مؤثره EO اصلي مرکبات په توګه پیژندل شوي او په انفرادي ډول د بالغ مصري ایډز مچیو په وړاندې ازمول شوي. د پروبیټ ریګریشن تحلیل له مخې، یوډیسمول د LC50 ارزښت 1.82 ppm سره ترټولو لوړ ظرفیت درلودونکی وموندل شو، ورپسې یوکلیپټول د LC50 ارزښت 17.60 ppm سره د 24 ساعتونو د تماس په وخت کې راځي. پاتې پنځه مرکبات چې ازمول شوي د LC50s سره د لویانو لپاره په اعتدال ډول زیانمنونکي وو چې د 140.79 څخه تر 737.01 ppm پورې دي (جدول 3). مصنوعي ارګانوفاسفورس مالاتیون د یوډیسمول په پرتله لږ قوي او د نورو شپږو مرکباتو په پرتله لوړ و، د LC50 ارزښت د 24 ساعتونو د تماس په موده کې 5.44 ppm سره (جدول 3، ضمیمه جدول 6).
اووه قوي لیډ مرکبات او ارګانوفاسفورس ټیمیفوسیټ د 1:1 تناسب کې د دوی د LC50 دوزونو بائنری ترکیبونو جوړولو لپاره غوره شوي. په ټولیزه توګه 28 بائنری ترکیبونه چمتو شوي او د ایډز ایجیپټي په وړاندې د دوی د لاروا وژونکي اغیزمنتوب لپاره ازمول شوي. نهه ترکیبونه د همغږۍ وړ وموندل شول، 14 ترکیبونه مخالف وو، او پنځه ترکیبونه د لاروا وژونکي نه وو. د همغږۍ ترکیبونو په مینځ کې، د ډایلیل ډیسلفایډ او ټیموفول ترکیب ترټولو مؤثر و، چې د 24 ساعتونو وروسته 100٪ مړینه لیدل شوې (جدول 4). په ورته ډول، د ډایلیل ډیسلفایډ او یوجینول سره د تیمیټفوس سره د لیمونین مخلوط د 98.3٪ د لیدل شوي لاروا مړینې سره ښه ظرفیت ښودلی (جدول 5). پاتې څلور ترکیبونه، لکه یوډسمول پلس یوکلیپټول، یوډسمول پلس لیمونین، یوکلیپټول پلس الفا-پینین، الفا-پینین پلس ټیمیفوس، هم د لاروا وژونکو لپاره د پام وړ اغیزمنتوب ښودلی، چې د مړینې کچه یې له 90٪ څخه زیاته وه. د مړینې تمه شوې کچه نږدې 60-75٪ ده. (جدول 4). په هرصورت، د α-پینین یا یوکلیپټس سره د لیمونین ترکیب ضد غبرګونونه ښودلي. په ورته ډول، د ټیمیفوس مخلوط د یوجینول یا یوکلیپټس یا یوډسمول یا ډایلیل ټرای سلفایډ سره د ضد اغیزې موندل شوي. په ورته ډول، د ډایلیل ډیسلفایډ او ډایلیل ټرای سلفایډ ترکیب او د دې مرکباتو څخه د یوډیسول یا یوجینول سره ترکیب د دوی په لاروا وژونکو عمل کې مخالف دي. د یوجینول یا α-پینین سره د یوډیسول ترکیب سره د مخالفت راپور هم ورکړل شوی.
د ټولو ۲۸ بائنري مخلوطونو څخه چې د لویانو د تیزابي فعالیت لپاره ازمول شوي، ۷ ترکیبونه همغږي کوونکي وو، ۶ یې هیڅ اغیزه نه درلوده، او ۱۵ یې ضد وو. د یوکلیپتوس سره د یوډزمول او لیمونین او کاروون مخلوط د نورو همغږي کونکو ترکیبونو په پرتله ډیر اغیزمن وموندل شول، د مړینې کچه په ترتیب سره په ۲۴ ساعتونو کې ۷۶٪ او ۱۰۰٪ وه (جدول ۵). مالاتیون لیدل شوی چې د لیمونین او ډایلیل ټرای سلفایډ پرته د ټولو مرکبونو سره همغږي کونکي اغیز ښیې. له بلې خوا، د ډایلیل ډیسلفایډ او ډایلیل ټرای سلفایډ او د یوکلیپتوس، یا یوکلیپتوس، یا کاروون، یا لیمونین سره د دوی د ترکیب ترمنځ مخالفت موندل شوی. په ورته ډول، د α-pinene او یوکلیپتوس، یا یوکلیپتوس، یا کاروون، یا لیمونین سره د یوکلیپتوس، او لیمونین او یوکلیپتوس سره د یوکلیپتوس لارویسایډال اغیزې ښودلې. د پاتې شپږو ترکیبونو لپاره، د متوقع او مشاهده شوي مړینې ترمنځ کوم د پام وړ توپیر نه و (جدول 5).
د synergistic اغیزو او فرعي وژونکو دوزونو پراساس، د Aedes aegypti مچیو د لوی شمیر په وړاندې د دوی د لاروا وژونکي زهریت په پای کې وټاکل شو او نور یې و ازمول شو. پایلو وښودله چې د eugenol-limonene، diallyl disulfide-limonene او diallyl disulfide-timephos د بائنری ترکیبونو په کارولو سره لیدل شوي لاروا مړینه 100٪ وه، پداسې حال کې چې د متوقع لاروا مړینه په ترتیب سره 76.48٪، 72.16٪ او 63.4٪ وه (جدول 6). . د limonene او eudesmol ترکیب نسبتا لږ اغیزمن و، د 24 ساعتونو د افشا کولو دورې په اوږدو کې د 88٪ لاروا مړینه لیدل شوې وه (جدول 6). په لنډیز کې، څلورو غوره شوي بائنری ترکیبونو هم د Aedes aegypti په وړاندې د همغږۍ لاروا وژونکي اغیزې ښودلې کله چې په لویه کچه پلي کیږي (جدول 6).
د بالغو ایډز ایجپټي د لوی نفوس کنټرول لپاره د بالغو ضد بایو ازموینې لپاره درې همغږي کونکي ترکیبونه غوره شوي. د لویو حشراتو کالونیو باندې د ازموینې لپاره ترکیبونو غوره کولو لپاره، موږ لومړی په دوه غوره همغږي کونکي ټیرپین ترکیبونو تمرکز وکړ، چې کارون پلس لیمونین او یوکلیپټول پلس یوډیسمول دي. دوهم، غوره همغږي کونکي ترکیب د مصنوعي ارګانوفاسفیټ مالاتیون او ټیرپینایډونو ترکیب څخه غوره شو. موږ باور لرو چې د ملاتیون او یوډیسمول ترکیب د لویو حشراتو کالونیو کې د ازموینې لپاره غوره ترکیب دی ځکه چې د لوړې مشاهدې مړینې او د نوماند اجزاو خورا ټیټ LC50 ارزښتونه شتون لري. مالاتیون د α-pinene، diallyl disulfide، eucalyptus، carvone او eudesmol سره په ترکیب کې همغږي ښیې. مګر که موږ LC50 ارزښتونو ته وګورو، یوډیسمول ترټولو ټیټ ارزښت لري (2.25 ppm). د مالاتهون، α-pinene، ډایلیل ډیسلفایډ، یوکلیپټول او کاروون محاسبه شوي LC50 ارزښتونه په ترتیب سره 5.4، 716.55، 166.02، 17.6 او 140.79 ppm وو. دا ارزښتونه ښیي چې د مالاتهون او یوډسمول ترکیب د خوراک له پلوه غوره ترکیب دی. پایلو ښودلې چې د کاروون پلس لیمونین او یوډسمول پلس مالاتهون ترکیبونو د مړینې کچه 100٪ مشاهده کړې وه په پرتله چې د 61٪ څخه تر 65٪ پورې تمه شوې مړینه وه. بل ترکیب، یوډسمول پلس یوکلیپټول، د 24 ساعتونو تماس وروسته د مړینې کچه 78.66٪ ښودلې، د 60٪ د متوقع مړینې کچې په پرتله. ټولو دریو غوره شویو ترکیبونو د همغږۍ اغیزې ښودلې حتی کله چې د لویانو ایډز ایجپټي په وړاندې په لویه کچه پلي کیږي (جدول 6).
په دې څیړنه کې، د Aedes aegypti په لاروا او بالغو مرحلو کې د غوره شویو نباتاتو EOs لکه Mp، As، Os، Em او Cl ژمنې وژونکې اغیزې ښودلې. Mp EO د 0.42 ppm د LC50 ارزښت سره ترټولو لوړ لاروا وژونکی فعالیت درلود، ورپسې As، Os او Em EOs د 24 ساعتونو وروسته د 50 ppm څخه کم LC50 ارزښت سره راځي. دا پایلې د مچیو او نورو ډیپټروس مچانو پخوانیو مطالعاتو سره مطابقت لري 10,11,12,13,14. که څه هم د Cl د لاروا وژونکي ځواک د نورو اړینو غوړیو په پرتله ټیټ دی، د 24 ساعتونو وروسته د LC50 ارزښت 163.65 ppm سره، د هغې بالغ ظرفیت د 24 ساعتونو وروسته د LC50 ارزښت 23.37 ppm سره ترټولو لوړ دی. د Mp، As او Em EOs هم د LC50 ارزښتونو سره د 24 ساعتونو په تماس کې د 100-120 ppm په حد کې د الرجیک اغیزې سره ښه الرجیک وړتیا ښودلې، مګر د دوی د لاروا وژونکي اغیزمنتوب څخه نسبتا ټیټ وو. له بلې خوا، EO Os حتی په لوړ معالجوي دوز کې د نه منلو وړ الرجیک اغیز ښودلی. په دې توګه، پایلې ښیي چې نباتاتو ته د ایتیلین اکسایډ زهریت ممکن د مچیو د پراختیا مرحلې پورې اړه ولري 15. دا د حشراتو په بدن کې د EOs د ننوتلو کچه، د ځانګړي هدف انزایمونو سره د دوی تعامل، او په هر پرمختیایي مرحله کې د مچیو د پاکولو ظرفیت پورې هم اړه لري 16. ډیری مطالعاتو ښودلې چې اصلي اجزا مرکب د ایتیلین اکسایډ د بیولوژیکي فعالیت کې یو مهم فاکتور دی، ځکه چې دا د ټول مرکباتو اکثریت جوړوي 3,12,17,18. له همدې امله، موږ په هر EO کې دوه اصلي مرکبات په پام کې ونیول. د GC-MS پایلو پراساس، ډایلیل ډیسلفایډ او ډایلیل ټرای سلفایډ د EO As د مهمو مرکباتو په توګه پیژندل شوي، کوم چې د پخوانیو راپورونو سره مطابقت لري19,20,21. که څه هم پخوانیو راپورونو ښودلې چې مینتول د هغې یو له اصلي مرکباتو څخه و، کارون او لیمونین بیا د Mp EO22,23 اصلي مرکباتو په توګه پیژندل شوي. د Os EO د ترکیب پروفایل ښودلې چې یوجینول او میتیل یوجینول اصلي مرکبات دي، کوم چې د پخوانیو څیړونکو موندنو سره ورته دی16,24. یوکلیپټول او یوکلیپټول د ایم پاڼی غوړ کې د اصلي مرکباتو په توګه راپور شوي، کوم چې د ځینو څیړونکو موندنو سره مطابقت لري25,26 مګر د اولاد او نورو موندنو برعکس.27. د سینیول او α-پینین تسلط په میلیلیوکا لازمي غوړ کې لیدل شوی، کوم چې د پخوانیو مطالعاتو سره ورته دی28,29. په مختلفو ځایونو کې د ورته نباتاتو ډولونو څخه استخراج شوي اړینو غوړیو په ترکیب او غلظت کې داخلي توپیرونه راپور شوي او په دې څیړنه کې هم لیدل شوي، کوم چې د جغرافیایي نباتاتو د ودې شرایطو، د حاصلاتو وخت، د پراختیا مرحله، یا د نبات عمر لخوا اغیزمن کیږي. د کیموټایپونو څرګندیدل، او نور.22,30,31,32. بیا کلیدي پیژندل شوي مرکبات د دوی د لاروا وژونکو اغیزو او د بالغ ایډیس ایجیپټي مچیو باندې اغیزو لپاره اخیستل شوي او ازمول شوي. پایلو ښودلې چې د ډایلیل ډیسلفایډ لاروا وژونکو فعالیت د خام EO As سره پرتله کیدونکی و. مګر د ډایلیل ټرای سلفایډ فعالیت د EO As څخه لوړ دی. دا پایلې د کیمبریس او نورو لخوا ترلاسه شوي ورته دي. 33 په کولیکس فیلیپین کې. په هرصورت، دې دوو مرکباتو د هدف مچیو په وړاندې ښه اتومات وژونکي فعالیت نه دی ښودلی، کوم چې د ټینبریو مولیټر په اړه د پلاټا-رویډا او نورو 34 پایلو سره مطابقت لري. Os EO د ایډیس ایجیپټي د لاروا مرحلې په وړاندې اغیزمن دی، مګر د بالغ مرحلې په وړاندې نه. دا ثابته شوې ده چې د اصلي انفرادي مرکباتو د لاروا وژونکي فعالیت د خام Os EO په پرتله ټیټ دی. دا د نورو مرکباتو او د دوی د تعاملاتو لپاره د خام ایتیلین اکسایډ رول په ګوته کوي. یوازې میتیل یوجینول د پام وړ فعالیت لري، پداسې حال کې چې یوازې یوجینول د لاروا وژونکي اعتدال فعالیت لري. دا پایله، له یوې خوا، 35،36 تاییدوي، او له بلې خوا، د پخوانیو څیړونکو د پایلو سره مخالفت کوي 37،38. د یوجینول او میتیلیوجینول په فعال ګروپونو کې توپیر ممکن د ورته هدف حشراتو لپاره مختلف زهرجنیتونه رامینځته کړي 39. لیمونین وموندل شو چې د لاروا وژونکي اعتدال فعالیت لري، پداسې حال کې چې د کارون اغیز مهم نه و. په ورته ډول، د لویانو حشراتو لپاره د لیمونین نسبتا ټیټ زهرجنیت او د کارون لوړ زهرجنیت د ځینو پخوانیو مطالعاتو پایلې ملاتړ کوي 40 مګر د نورو سره مخالفت کوي 41. د انټراسایکلیک او ایکوسایکلیک دواړو موقعیتونو کې د دوه ګوني بانډونو شتون ممکن د لارویسایډونو په توګه د دې مرکباتو ګټې زیاتې کړي 3,41، پداسې حال کې چې کارون، کوم چې د غیر مشبوع الفا او بیټا کاربنونو سره کیټون دی، ممکن په لویانو کې د زهرجن کیدو لپاره لوړ ظرفیت وښيي 42. په هرصورت، د لیمونین او کارون انفرادي ځانګړتیاوې د ټول EO Mp (جدول 1، جدول 3) په پرتله خورا ټیټې دي. د ټیرپینایډونو په منځ کې، یوډسمول وموندل شو چې د LC50 ارزښت د 2.5 ppm څخه ښکته سره ترټولو لوی لارویسایډل او بالغ فعالیت لري، چې دا د ایډز مچیو کنټرول لپاره یو امید لرونکی مرکب جوړوي. د دې فعالیت د ټول EO Em په پرتله غوره دی، که څه هم دا د چینګ او نورو موندنو سره مطابقت نلري. 40. یوډسمول یو سیسکویټرپین دی چې دوه ایزوپرین واحدونه لري چې د اکسیجن شوي مونوټیرپینونو لکه یوکلیپټس په پرتله لږ بې ثباته دی او له همدې امله د آفت وژونکو په توګه ډیر ظرفیت لري. یوکلیپټول پخپله د لاروا وژونکو په پرتله لوی فعالیت لري، او د پخوانیو مطالعاتو پایلې دواړه د دې ملاتړ او رد کوي 37,43,44. یوازې فعالیت تقریبا د ټول EO Cl سره پرتله کیدونکی دی. یو بل بایسکل مونوټیرپین، α-pinene، د لاروا وژونکو په پرتله په Aedes aegypti باندې لږ لوی اغیز لري، کوم چې د بشپړ EO Cl اغیز برعکس دی. د ټیرپینایډونو ټول حشره وژونکي فعالیت د دوی د لیپوفیلیسیت، بې ثباتۍ، کاربن شاخ کولو، پروجیکشن ساحه، سطحې ساحې، فعال ګروپونو او د دوی موقعیتونو لخوا اغیزمن کیږي 45,46. دا مرکبات ممکن د حجرو راټولولو له منځه وړلو، د تنفسي فعالیت بندولو، د عصبي هڅونو لیږد بندولو، او داسې نورو سره عمل وکړي. 47 مصنوعي ارګانوفاسفیټ ټیمیفوس وموندل شو چې د LC50 ارزښت 0.43 ppm سره ترټولو لوړ لاروا وژونکي فعالیت لري، کوم چې د لیک د معلوماتو -Utala48 سره مطابقت لري. د مصنوعي ارګانوفاسفورس مالاتیون د بالغانو فعالیت په 5.44 ppm کې راپور شوی. که څه هم دې دوه ارګانوفاسفیټ د Aedes aegypti د لابراتوار ډولونو په وړاندې مناسب غبرګون ښودلی دی، د نړۍ په مختلفو برخو کې د دې مرکباتو په وړاندې د مچیو مقاومت راپور شوی دی 49. په هرصورت، د بوټو درملو په وړاندې د مقاومت پراختیا په اړه ورته راپورونه ندي موندل شوي 50. په دې توګه، نباتات د ویکتور کنټرول پروګرامونو کې د کیمیاوي آفت وژونکو لپاره د احتمالي بدیل په توګه ګڼل کیږي.
د لاروا وژونکي اغیز په ۲۸ دوه اړخیزو ترکیبونو (۱:۱) باندې ازمول شوی چې د قوي ټیرپینایډونو او ټیرپینایډونو څخه د تیمیټفوس سره چمتو شوي، او ۹ ترکیبونه د همغږۍ، ۱۴ ضد او ۵ ضد وموندل شول. هیڅ اغیزه نلري. له بلې خوا، د بالغ ځواک بایوسای کې، ۷ ترکیبونه د همغږۍ، ۱۵ ترکیبونه د مخالفت، او ۶ ترکیبونو د هیڅ اغیز نه درلودو راپور ورکړل شوی. دلیل چې ولې ځینې ترکیبونه د همغږۍ اغیز تولیدوي ممکن د نوماند مرکباتو له امله وي چې په مختلفو مهمو لارو کې په ورته وخت کې تعامل کوي، یا د یو ځانګړي بیولوژیکي لارې د مختلفو کلیدي انزایمونو د پرله پسې مخنیوي له امله وي51. د ډایلیل ډیسلفایډ، یوکلیپټس یا یوجینول سره د لیمونین ترکیب په کوچنیو او لویو دواړو غوښتنلیکونو کې همغږي وموندل شو (جدول ۶)، پداسې حال کې چې د یوکلیپټس یا α-پینین سره د هغې ترکیب د لاروا په ضد اغیزې درلودې وموندل شوې. په اوسط ډول، لیمونین یو ښه ترکیب کوونکی ښکاري، ممکن د میتیل ګروپونو شتون، د سټراټم کورنیوم ته ښه نفوذ، او د عمل مختلف میکانیزم له امله 52,53. مخکې راپور ورکړل شوی و چې لیمونین ممکن د حشراتو د پوستکي (د تماس زهرجنیت) د ننوتلو له لارې زهرجن اغیزې رامینځته کړي، د هاضمې سیسټم (د خوړو ضد) اغیزه وکړي، یا د تنفسي سیسټم (د بخار فعالیت) اغیزه وکړي، 54 پداسې حال کې چې فینیلپروپانوایډونه لکه یوجینول ممکن میټابولیک انزایمونه 55 اغیزمن کړي. له همدې امله، د عمل مختلف میکانیزمونو سره د مرکبونو ترکیب ممکن د مخلوط ټول وژونکي اغیز زیات کړي. یوکلیپټول د ډایلیل ډیسلفایډ، یوکلیپټوس یا α-پینین سره همغږي وموندل شو، مګر د نورو مرکبونو سره نور ترکیبونه یا غیر لاروا وژونکي یا ضد وو. لومړنیو مطالعاتو ښودلې چې یوکلیپټول د اسیتیلچولینسټریز (AChE)، او همدارنګه د اوکټامین او GABA ریسیپټرونو 56 باندې مخنیوی فعالیت لري. څرنګه چې سایکلیک مونوټیرپینز، یوکلیپټول، یوجینول، او نور ممکن د دوی د نیوروټوکسیک فعالیت په څیر د عمل ورته میکانیزم ولري، 57 په دې توګه د متقابل مخنیوي له لارې د دوی ګډ اغیزې کموي. په ورته ډول، د ټیمفوس ترکیب د ډایلیل ډیسلفایډ، α-پینین او لیمونین سره همغږي وموندل شو، چې د بوټو محصولاتو او مصنوعي ارګانوفاسفیټ ترمنځ د همغږۍ اغیزې پخوانیو راپورونو ملاتړ کوي58.
د ایودسمول او یوکلیپټول ترکیب د ایدیس ایجیپټي په لاروا او بالغو مرحلو کې یو همغږی اغیزه درلوده، ممکن د دوی د مختلف کیمیاوي جوړښتونو له امله د عمل مختلف طریقو له امله. یودسمول (یو سیسکویټرپین) ممکن د تنفسي سیسټم 59 اغیزه وکړي او یوکلیپټول (یو مونوټیرپین) ممکن اسیتیلچولینیسټریز 60 اغیزه وکړي. د اجزاو دوه یا ډیرو هدف ځایونو ته ګډ تماس ممکن د ترکیب ټول وژونکي اغیز لوړ کړي. د لویانو د موادو بایوسای کې، مالاتیون د کارون یا یوکلیپټول یا یوکلیپټول یا ډایلیل ډیسلفایډ یا α-پینین سره همغږی وموندل شو، دا په ګوته کوي چې دا د لیمونین او ډای اضافه کولو سره همغږی دی. د ټیرپین مرکباتو د ټول پورټ فولیو لپاره ښه همغږی الرسایډ نوماندان، د الیل ټرای سلفایډ استثنا پرته. تانګام او کاتیریسان 61 هم د بوټو استخراج سره د ملاتیون د همغږی اغیزې ورته پایلې راپور کړې. دا همغږي غبرګون ممکن د حشراتو د پاکولو انزایمونو باندې د مالاتیون او فایټو کیمیکلونو د ګډ زهرجن اغیزو له امله وي. ارګانوفاسفیټ لکه مالاتیون عموما د سایټوکروم P450 ایسټریز او مونو اکسیجنیزز 62,63,64 مخنیوي سره عمل کوي. له همدې امله، د مالاتیون او ټیرپینز د عمل د مختلفو میکانیزمونو سره یوځای کول ممکن په مچیو باندې ټول وژونکي اغیز لوړ کړي.
له بلې خوا، مخالفت ښيي چې ټاکل شوي مرکبات د هر مرکب په پرتله په ترکیب کې لږ فعال دي. په ځینو ترکیبونو کې د مخالفت دلیل ممکن دا وي چې یو مرکب د جذب، ویش، میټابولیزم، یا اخراج د کچې په بدلولو سره د بل مرکب چلند بدلوي. لومړنیو څیړونکو دا د درملو په ترکیبونو کې د مخالفت لامل ګڼلی و. مالیکولونه ممکن میکانیزم 65. په ورته ډول، د مخالفت احتمالي لاملونه ممکن د عمل ورته میکانیزمونو پورې اړه ولري، د ورته ریسیپټر یا هدف سایټ لپاره د اجزاو مرکباتو سیالي. په ځینو مواردو کې، د هدف پروټین غیر سیالي مخنیوی هم واقع کیدی شي. پدې څیړنه کې، دوه ارګانوسلفر مرکبات، ډایلیل ډیسلفایډ او ډایلیل ټرای سلفایډ، د مخالف اغیزې ښودلې، ممکن د ورته هدف سایټ لپاره د سیالۍ له امله. په ورته ډول، دا دوه سلفر مرکبات د مخالف اغیزې ښودلې او کله چې د یوډسمول او α-پینین سره یوځای شي هیڅ اغیزه نه درلوده. یوډسمول او الفا-پینین په طبیعت کې سایکلیک دي، پداسې حال کې چې ډایلیل ډیسلفایډ او ډایلیل ټرای سلفایډ په طبیعت کې الیفاټیک دي. د کیمیاوي جوړښت پراساس، د دې مرکباتو ترکیب باید ټول وژونکي فعالیت زیات کړي ځکه چې د دوی هدف ځایونه معمولا توپیر لري 34,47، مګر په تجربوي ډول موږ مخالفت وموند، کوم چې ممکن د ځینو نامعلومو ژوندی موجوداتو کې د دې مرکباتو رول له امله وي. د تعامل په پایله کې سیسټمونه. په ورته ډول، د سینیول او α-پینین ترکیب ضد غبرګونونه رامینځته کړل، که څه هم څیړونکو دمخه راپور ورکړی و چې دواړه مرکبات د عمل مختلف هدفونه لري 47,60. څرنګه چې دواړه مرکبات سایکلیک مونوټیرپینونه دي، ممکن ځینې عام هدف ځایونه وي چې ممکن د تړلو لپاره سیالي وکړي او د مطالعې شوي ترکیب جوړو ټول زهرجنیت اغیزه وکړي.
د LC50 ارزښتونو او مشاهده شوي مړینې پراساس، دوه غوره synergistic terpene ترکیبونه غوره شول، یعنې د کارون + لیمونین او یوکلیپټول + یوډیسمول جوړه، او همدارنګه د terpenes سره مصنوعي ارګانوفاسفورس مالاتیون. د مالاتیون + یوډیسمول مرکباتو غوره synergistic ترکیب د بالغ حشره وژونکو بایوسای کې ازمول شوی. د لویو حشراتو کالونیو په نښه کړئ ترڅو تایید کړئ چې ایا دا اغیزمن ترکیبونه کولی شي د نسبتا لویو افشا کولو ځایونو کې د لوی شمیر اشخاصو پروړاندې کار وکړي. دا ټول ترکیبونه د حشراتو د لویو ډلو په وړاندې یو synergistic اغیز ښیې. د Aedes aegypti لاروا د لوی نفوس په وړاندې د ازمول شوي غوره synergistic larvicidal ترکیب لپاره ورته پایلې ترلاسه شوې. په دې توګه، دا ویل کیدی شي چې د نبات EO مرکباتو اغیزمن synergistic larvicidal او adult synergistic lervicidal ترکیب د موجوده مصنوعي کیمیاوي موادو په وړاندې یو قوي نوماند دی او د Aedes aegypti نفوس کنټرول لپاره نور هم کارول کیدی شي. په ورته ډول، د مصنوعي لاروا وژونکو یا بالغ وژونکو مؤثر ترکیبونه د ټیرپینز سره هم کارول کیدی شي ترڅو د تیمیټفوس یا مالاتیون خوراکونه کم کړي چې مچیو ته ورکول کیږي. دا قوي همغږي ترکیبونه ممکن د ایډیز مچیو کې د مخدره توکو مقاومت د ارتقا په اړه د راتلونکو مطالعاتو لپاره حلونه چمتو کړي.
د ایډیس ایجپټي هګۍ د ډیبروګر د سیمه ایز طبي څیړنې مرکز، د هند د طبي څیړنې شورا څخه راټولې شوې او د ګوهاټي پوهنتون د ژوولوژي په څانګه کې د کنټرول شوي تودوخې (28 ± 1 ° C) او رطوبت (85 ± 5٪) لاندې په لاندې شرایطو کې ساتل شوې: اریولي او نور تشریح شوي. د هګیو له وتلو وروسته، لاروا ته د لاروا خواړه ورکړل شول (د سپي بسکټ پوډر او خمیر په 3:1 تناسب کې) او لویانو ته د 10٪ ګلوکوز محلول ورکړل شو. د راڅرګندیدو وروسته په دریمه ورځ پیل کولو سره، بالغ ښځینه مچیو ته اجازه ورکړل شوه چې د البینو موږکانو وینه وخوري. د فلټر کاغذ په یوه شیشه کې په اوبو کې ډوب کړئ او د هګیو ورکولو په پنجره کې یې ځای په ځای کړئ.
د نباتاتو غوره شوي نمونې لکه د یوکلیپتوس پاڼې (میرټاسی)، مقدس ریحان (لامیسی)، نعناع (لامیسی)، میلالیوکا (میرټاسی) او ایلیم بلبونه (اماریلیډیسی). د ګوهاټي څخه راټول شوي او د ګوهاټي پوهنتون د نباتاتو څانګې لخوا پیژندل شوي. راټول شوي نباتات نمونې (500 ګرامه) د 6 ساعتونو لپاره د کلیوینجر اپریټس په کارولو سره د هایدرو ډیسټیلیشن سره مخ شوي. استخراج شوی EO په پاکو شیشې شیشو کې راټول شوی او د نورو مطالعې لپاره په 4 درجو سانتي ګراد کې زیرمه شوی.
د لاروا وژونکي زهریت د نړیوال روغتیا سازمان د معیاري طرزالعملونو 67 په کارولو سره مطالعه شوی. د DMSO څخه د ایملسیفیر په توګه کار واخلئ. د هر EO غلظت په پیل کې په 100 او 1000 ppm کې ازمول شوی و، چې په هر نقل کې 20 لاروا افشا کوي. د پایلو پراساس، د غلظت حد پلي شو او مړینه د 1 ساعت څخه تر 6 ساعتونو پورې (د 1 ساعت وقفې سره) ثبت شوه، او د درملنې وروسته په 24 ساعتونو، 48 ساعتونو او 72 ساعتونو کې. د فرعي وژونکي غلظت (LC50) د 24، 48 او 72 ساعتونو افشا کیدو وروسته ټاکل شوی و. هر غلظت په درې اړخیزه توګه د یو منفي کنټرول (یوازې اوبه) او یو مثبت کنټرول (DMSO درملنه شوي اوبه) سره ارزول شوی و. که چیرې پوپشن واقع شي او د کنټرول ګروپ له 10٪ څخه ډیر لاروا مړه شي، تجربه تکرار کیږي. که چیرې د کنټرول ګروپ کې د مړینې کچه د 5-10٪ ترمنځ وي، د ایبټ اصلاح فورمول 68 وکاروئ.
هغه طریقه چې د رامار او نورو لخوا تشریح شوې وه. 69 د بالغانو د اډیس ایجیپټي په وړاندې د بایو ازموینې لپاره د اسیټون په کارولو سره د محلول په توګه کارول کیده. هر EO په پیل کې د 100 او 1000 ppm په غلظت کې د بالغ اډیس ایجیپټي مچیو په وړاندې ازمول شوی و. د هر چمتو شوي محلول 2 ملی لیتر د واټمن شمیرې ته تطبیق کړئ. د فلټر کاغذ یوه ټوټه (اندازه 12 x 15 سانتي متره) او اسیټون ته د 10 دقیقو لپاره بخار پریږدئ. د فلټر کاغذ چې یوازې 2 ملی لیتر اسیټون سره درملنه شوی و د کنټرول په توګه کارول شوی و. وروسته له دې چې اسیټون تبخیر شي، درملنه شوی فلټر کاغذ او د کنټرول فلټر کاغذ په یوه سلنډر ټیوب (10 سانتي متره ژور) کې ځای په ځای کیږي. لس له 3 څخه تر 4 ورځو پورې د وینې نه تغذیه کونکي مچۍ د هر غلظت درې ګوني ته لیږدول شوي. د لومړنیو ازموینو د پایلو پراساس، د ټاکل شوي تیلو مختلف غلظتونه ازمول شوي. د مړینې کچه د مچیو له خوشې کیدو وروسته په ۱ ساعت، ۲ ساعته، ۳ ساعته، ۴ ساعته، ۵ ساعته، ۶ ساعته، ۲۴ ساعته، ۴۸ ساعته او ۷۲ ساعتونو کې ثبت شوه. د ۲۴ ساعتونو، ۴۸ ساعتونو او ۷۲ ساعتونو د افشا کیدو وختونو لپاره د LC50 ارزښتونه محاسبه کړئ. که چیرې د کنټرول لاټ د مړینې کچه له ۲۰٪ څخه زیاته وي، نو ټوله ازموینه بیا تکرار کړئ. په ورته ډول، که چیرې د کنټرول ګروپ کې د مړینې کچه له ۵٪ څخه زیاته وي، نو د درملنې شوي نمونو لپاره پایلې د ایبټ فورمول ۶۸ په کارولو سره تنظیم کړئ.
د ټاکل شویو اړینو تیلو د اجزاو د تحلیل لپاره د ګاز کروماتګرافي (Agilent 7890A) او ډله ایز سپیکٹرومیټري (Accu TOF GCv، Jeol) ترسره شوه. GC د FID کشف کونکي او د کیپلیري ستون (HP5-MS) سره سمبال و. د بار وړونکي ګاز هیلیم و، د جریان کچه یې 1 ملی لیتر/دقیقه وه. د GC پروګرام د Allium sativum 10:80-1M-8-220-5M-8-270-9M او Ocimum Sainttum 10:80-3M-8-200-3M-10-275-1M-5 – 280 ته، د mint 10:80-1M-8-200-5M-8-275-1M-5-280 لپاره، د eucalyptus 20.60-1M-10-200-3M-30-280 لپاره، او د سره لپاره د زرو طبقو لپاره دوی 10:60-1M-8-220-5M-8-270-3M دي.
د هر EO لوی مرکبات د GC کروماتګرام او ډله ایز سپیکرومیټري پایلو څخه محاسبه شوي ساحې سلنه پراساس پیژندل شوي (د NIST 70 معیارونو ډیټابیس ته راجع شوي).
په هر EO کې دوه لوی مرکبات د GC-MS پایلو پراساس غوره شوي او د نورو بایو ازموینې لپاره د سیګما-الډریچ څخه په 98-99٪ خالصیت کې اخیستل شوي. مرکبات د ایډز ایجیپټي په وړاندې د لاروا وژونکو او لویانو اغیزمنتوب لپاره ازمول شوي لکه څنګه چې پورته تشریح شوي. ترټولو عام کارول شوي مصنوعي لاروا وژونکي ټیمفوسیټ (سیګما الډریچ) او د لویانو درمل ملاتیون (سیګما الډریچ) تحلیل شوي ترڅو د ورته پروسې په تعقیب د غوره شوي EO مرکباتو سره د دوی اغیزمنتوب پرتله کړي.
د ټاکل شویو ټیرپین مرکباتو او ټیرپین مرکباتو او سوداګریزو ارګانوفاسفیتونو (ټیلفوس او مالاتیون) دوه ګونی مخلوطونه د هر نوماند مرکب د LC50 دوز په 1:1 تناسب کې مخلوط کولو سره چمتو شوي. چمتو شوي ترکیبونه د ایډز ایجیپټي په لاروا او بالغ مرحلو کې ازمول شوي لکه څنګه چې پورته تشریح شوي. هر بایوسای د هر ترکیب لپاره په درې ګونی ډول او په هر ترکیب کې موجود انفرادي مرکباتو لپاره په درې ګونی ډول ترسره شو. د هدف حشراتو مړینه د 24 ساعتونو وروسته ثبت شوه. د لاندې فورمول په کارولو سره د دوه ګونی مخلوط لپاره د متوقع مړینې کچه محاسبه کړئ.
چیرې چې E = د بائنری ترکیب په ځواب کې د اډیس ایجیپټي مچیو د مړینې تمه شوې کچه، د بیلګې په توګه اړیکه (A + B).
د هر بائنري مخلوط اغیز د χ2 ارزښت پراساس چې د پاول52 لخوا تشریح شوي میتود لخوا محاسبه شوی و، د synergistic، antagonistic، یا هیڅ اغیز په توګه لیبل شوی و. د لاندې فورمول په کارولو سره د هر ترکیب لپاره χ2 ارزښت محاسبه کړئ.
د ترکیب اغیز هغه وخت د همغږۍ په توګه تعریف شو کله چې محاسبه شوی χ2 ارزښت د آزادۍ اړوند درجو لپاره د جدول ارزښت څخه ډیر وي (95٪ د باور وقفه) او که چیرې مشاهده شوی مړینه د متوقع مړینې څخه ډیر وموندل شي. په ورته ډول، که چیرې د کوم ترکیب لپاره محاسبه شوی χ2 ارزښت د آزادۍ ځینې درجو سره د جدول ارزښت څخه ډیر وي، مګر مشاهده شوی مړینه د متوقع مړینې څخه ټیټه وي، درملنه متضاد ګڼل کیږي. او که چیرې په کوم ترکیب کې د χ2 محاسبه شوی ارزښت د آزادۍ اړوند درجو کې د جدول ارزښت څخه کم وي، نو ترکیب هیڅ اغیزه نلري.
د حشراتو د لوی شمیر په وړاندې د ازموینې لپاره له دریو څخه تر څلورو پورې احتمالي همغږیدونکي ترکیبونه (۱۰۰ لاروا او ۵۰ لاروا وژونکي او د لویانو حشراتو فعالیت) غوره شوي وو. لویان) د پورته په څیر پرمخ ځي. د مخلوطونو سره یوځای، په ټاکل شوي مخلوطونو کې موجود انفرادي مرکبات د اډیس ایجپټي لاروا او لویانو په مساوي شمیر باندې هم ازمول شوي. د ترکیب تناسب د یو نوماند مرکب د LC50 دوز یوه برخه او د بل غړي مرکب د LC50 دوز یوه برخه ده. د لویانو د فعالیت بایوسای کې، غوره شوي مرکبات په محلول اسیټون کې حل شوي او د فلټر کاغذ ته تطبیق شوي چې په 1300 سانتي متره 3 سلنډر پلاستيکي کانټینر کې پوښل شوي. اسیټون د 10 دقیقو لپاره تبخیر شو او لویان خوشې شول. په ورته ډول، د لاروا وژونکي بایوسای کې، د LC50 نوماند مرکباتو خوراکونه لومړی د DMSO په مساوي مقدارونو کې حل شوي او بیا د 1300 cc پلاستيکي کانټینرونو کې زیرمه شوي 1 لیټر اوبو سره مخلوط شوي، او لاروا خوشې شوي.
د LC50 ارزښتونو محاسبه کولو لپاره د SPSS (نسخه 16) او Minitab سافټویر په کارولو سره د 71 ثبت شوي مړینې معلوماتو احتمالي تحلیل ترسره شو.