د نباتاتو او ناروغیو مواد
د جوار د نفوس نقشه کولو ټولنه چې د جوار د بدلون نفوس (SCP) په نوم پیژندل کیږي د الینوای پوهنتون (اوس په UC Davis کې) کې د ډاکټر پیټ براون لخوا چمتو شوې وه. دا دمخه تشریح شوی او د متحده ایالاتو په چاپیریال کې د نباتاتو د ودې او پراختیا اسانتیا لپاره د فوتو پیریډ غیر حساسیت او کوچني قد ته بدل شوي متنوع لینونو ټولګه ده. پدې څیړنه کې د دې نفوس څخه 510 لینونه کارول شوي که څه هم د خراب ټوکیدنې او نورو کیفیت کنټرول مسلو له امله، ټولې لینونه د ټولو دریو ځانګړتیاو تحلیل کې نه دي کارول شوي. په نهایت کې د 345 لینونو څخه معلومات د چیټین غبرګون تحلیل لپاره، 472 لینونه د flg22 غبرګون لپاره، او 456 د TLS مقاومت لپاره کارول شوي.ب. کوکيد LSLP18 ډول د ارکنساس پوهنتون د ډاکټر برټ بلوم څخه ترلاسه شوی.
د MAMP غبرګون اندازه کول
په دې څیړنه کې دوه مختلف MAMPs کارول شوي flg22، (Genscript catalog# RP19986)، او chitin. د جوار بوټي په شنه خونه کې د خاورې ډک شوي فلیټونو (33٪ Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) کې ایښودل شوي داخلونو کې کرل شوي. نباتات د نمونې راټولولو څخه یوه ورځ مخکې اوبه شوي ترڅو د راټولولو په ورځ د پاڼو اضافي رطوبت څخه مخنیوی وشي.
کرښې په ناڅاپي ډول جوړې شوې او د لوژستیکي دلایلو له مخې، د 60 لیکو په ډله کې کښینول شوې. د هرې کرښې لپاره، درې 'لوښي' په هره کرښه کې دوه تخمونه سره کښینول شول. وروسته ډلې د پخوانۍ ډلې پروسس کیدو سره سم کښت شوې تر هغه چې ټول نفوس ارزول شوی نه وي. د دواړو MAMPs لپاره دوه تجربوي منډې ترسره شوې چې په دواړو منډو کې جینټایپونه بیا په ناڅاپي ډول بیا تنظیم شوي.
د ROS معاینې لکه څنګه چې مخکې تشریح شوې وې ترسره شوې. په لنډه توګه، د هرې کرښې لپاره، شپږ تخمونه په 3 مختلفو لوښو کې کرل شوي وو. د پایله لرونکو تخمونو څخه، درې د یووالي پراساس غوره شوي وو. هغه تخمونه چې غیر معمولي ښکاریدل یا د ډیری څخه د پام وړ لوړ یا لنډ وو کارول شوي نه وو. د 3 ملي میتر قطر څلور پاڼې ډیسکونه د دریو مختلفو 15 ورځو زاړه جوار بوټو د څلورمې پاڼې له پراخې برخې څخه ایستل شوي وو. د دوو بوټو څخه په هر پاڼه کې یو ډیسک او د یو نبات څخه دوه ډیسکونه، چې دوهم ډیسک د اوبو کنټرول شو (لاندې وګورئ). ډیسکونه په انفرادي ډول په تور 96 څاه پلیټ کې په 50 µl H20 کې تیر شوي وو، د المونیم مهر سره مهر شوي وو ترڅو د رڼا سره مخ نشي، او د شپې په خونه کې د خونې په تودوخه کې ساتل شوي وو. بله ورځ سهار د 2 mg/ml کیمیلومینیسینټ پروب L-012 (واکو، کتلاګ # 120-04891)، 2 mg/ml هارسریډش پیرو آکسیډیز (ډول VI-A، سیګما-الډریچ، کتلاګ # P6782)، او 100 mg/ml چیټین یا د Flg22 2 μM په کارولو سره د عکس العمل محلول جوړ شو. د دې تعامل محلول 50 μl د څلورو څاګانو څخه دریو ته اضافه شو. څلورم څا یو نقلي کنټرول و، چې د MAMP پرته د عکس العمل محلول پکې اضافه شو. په هر پلیټ کې څلور خالي څاګانې چې یوازې اوبه لري هم شاملې وې.
د تعامل محلول اضافه کولو وروسته، د لمر رڼا د SynergyTM 2 ملټي ډیټیکشن مایکروپلیټ ریډر (BioTek) په کارولو سره د 1 ساعت لپاره په هرو 2 دقیقو کې اندازه شوه. د پلیټ ریډر د دې 1 ساعت په جریان کې په هرو 2 دقیقو کې د لمر رڼا اندازه کوي. د ټولو 31 لوستلو مجموعه د هر څاه لپاره ارزښت ورکولو لپاره محاسبه شوې. د هر جینټایپ لپاره د MAMP ځواب لپاره اټکل شوی ارزښت د (د دریو تجربوي څاه ګانو د لمر رڼا اوسط ارزښت - د نقلي څاه ارزښت) په توګه محاسبه شوی - د اوسط خالي څاه ارزښت منفي. د خالي څاه ارزښتونه په دوامداره توګه صفر ته نږدې وو.
د پاڼو ډیسکونهنیکوتیانا بینټامیانا، د لوړ غبرګون لرونکي جوار یوه کرښه (SC0003)، او د ټیټ غبرګون لرونکي جوار یوه کرښه (PI 6069) هم د کیفیت کنټرول موخو لپاره په هر 96 څاه پلیټ کې د کنټرول په توګه شامله شوې وه.
ب. کوکيد واکسین چمتو کول او واکسین کول
ب. کوکيانوکولم لکه څنګه چې مخکې تشریح شوی چمتو شوی و. په لنډه توګه، د جوارو دانې د دریو ورځو لپاره په اوبو کې ډوب شوي، مینځل شوي، په 1 لیټر مخروطي فلاسکونو کې اچول شوي او د 15psi او 121 °C په تودوخه کې د یو ساعت لپاره اتوماتیک شوي. بیا دانې د تازه کلتور څخه شاوخوا 5 ملی لیتر مایسیریټ شوي مایسیلیا سره واکسین شوي.ب. کوکيLSLP18 جلا کیږي او د خونې په تودوخه کې د 2 اونیو لپاره پریښودل کیږي، په هرو 3 ورځو کې فلاسکونه وهل کیږي. د 2 اونیو وروسته، د فنګس اخته جوار دانې په هوا کې وچې شوې او بیا د ساحې د واکسین کولو پورې په 4 درجو سانتی ګراد کې زیرمه شوې. ورته واکسین د ټولې آزموینې لپاره کارول کیده او هر کال تازه جوړیږي. د واکسین کولو لپاره، 6-10 اخته شوي جوار د 4-5 اونیو زاړه جوار بوټو په څنډه کې ځای په ځای شوي. د دې فنګسونو څخه تولید شوي سپورونه د یوې اونۍ په اوږدو کې په ځوانو جوار بوټو کې انتان پیل کړ.
د تخم چمتو کول
د جوارو تخم په ځمکه کې د کښت کولو دمخه د فنګس وژونکو، حشره وژونکو او سیفنر مخلوط سره درملنه وشوه چې پکې ~ 1٪ سپیراټو 480 FS فنګس وژونکي، 4٪ سیبرینګ 480 FS فنګس وژونکي، 3٪ سورپرو 940 ES تخم سیفنر شامل وو. بیا تخمونه د 3 ورځو لپاره په هوا کې وچ شول چې د تخمونو شاوخوا د دې مخلوط یو پتلی پوښ چمتو کړ. سیفنر د بوټو وژونکو دوه ګونی میګنم د راڅرګندیدو دمخه درملنې په توګه کارولو ته اجازه ورکړه.
د هدفي پاڼو د داغونو د مقاومت ارزونه
SCP د جون په ۱۴-۱۵ ۲۰۱۷ او د جون په ۲۰، ۲۰۱۸ کې د کلیټن، شمالي کارولینا په مرکزي فصلونو څیړنیز سټیشن کې په تصادفي بشپړ بلاک ډیزاین کې وکرل شو چې په هر حالت کې دوه تجربوي نقلونه وو. تجربې په ۱.۸ متر واحد قطارونو کې د ۰.۹ متر قطار پلنوالي سره په هر پلاټ کې د ۱۰ تخمونو په کارولو سره وکرل شوې. د څنډې اغیزو مخنیوي لپاره د هرې تجربې په شاوخوا کې دوه سرحدي قطارونه وکرل شول. تجربې د جولای په ۲۰، ۲۰۱۷ او د جولای په ۲۰، ۲۰۱۸ کې واکسین شوې چې په هغه وخت کې د جوار بوټي د ودې په دریم پړاو کې وو. درجه بندي په یو نهه پیمانه کې اخیستل شوې، چیرې چې هغه نباتات چې د ناروغۍ نښې نه ښیې د نهو په توګه نمرې ورکړل شوې او په بشپړ ډول مړه شوي نباتات د یو په توګه نمرې ورکړل شوې. په ۲۰۱۷ کې دوه درجه بندي او په ۲۰۱۸ کې څلور لوستل هر کال د واکسین کولو څخه دوه اونۍ وروسته پیل کیږي. sAUDPC (د ناروغۍ د پرمختګ منحني لاندې معیاري ساحه) محاسبه شوه لکه څنګه چې مخکې تشریح شوې.
د پوسټ وخت: اپریل-۰۱-۲۰۲۱