د جینوم پراخه اتحادیې تحلیل د MAMP لخوا رامینځته شوي دفاعي غبرګون او په جوار کې د پاڼي ځای په نښه کولو مقاومت مقاومت

نبات او د رنځجن مواد

د سورغم ټولنې نقشه جوړونکي نفوس چې د سورغم د تبادلې نفوس (SCP) په نوم پیژندل کیږي د ډاکټر پیټ براون لخوا د الینوس پوهنتون (اوس په UC ډیوس کې) چمتو شوی.دا دمخه تشریح شوی او د متنوع لینونو ټولګه ده چې د فوتو پیریډ حساسیت او کوچني قد ته بدل شوي ترڅو د متحده ایالاتو په چاپیریال کې د نباتاتو وده او پراختیا اسانه کړي.په دې څیړنه کې د دې نفوس څخه 510 لینونه کارول شوي که څه هم د خراب ټوکیدنې او نورو کیفیت کنټرول مسلو له امله، ټولې کرښې د ټولو دریو ځانګړتیاو په تحلیل کې ندي کارول شوي.په نهایت کې د 345 لینونو ډاټا د chitin غبرګون تحلیل لپاره کارول شوي، 472 کرښې د flg22 ځواب لپاره، او 456 د TLS مقاومت لپاره.ب. کوکیفشار LSLP18 د ارکنساس په پوهنتون کې د ډاکټر برټ بلوم څخه ترلاسه شوی.

د MAMP غبرګون اندازه کول

په دې څیړنه کې دوه مختلف MAMPs کارول شوي flg22، (Genscript catalog# RP19986)، او chitin.د سورغم بوټي په شنو خونو کې د خاورې څخه ډک شوي فلیټونو کې ایښودل شوي (33٪ Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) کې کرل شوي.نباتات د نمونې راټولولو څخه یوه ورځ دمخه اوبه شوي ترڅو د راټولولو په ورځ د پاڼي اضافي رطوبت څخه مخنیوی وشي.

لینونه تصادفي شوي او د لوژستیکي دلایلو له مخې د 60 لینونو په بیچونو کې کرل شوي.د هرې کرښې لپاره، په هر کرښه کې د دوو تخمونو سره درې 'پوټونه' کرل شوي.وروستنۍ بستې د پخوانۍ بستې د پروسس کولو په څیر ژر تر ژره وکرل شوې ترڅو ټول نفوس ارزول شوي وي.دوه تجربوي منډې د دواړو MAMPs لپاره ترسره شوي چې د جینټایپونو سره په هر دوه منډو کې بیا تصادفي شوي.

د ROS ارزونه لکه څنګه چې مخکې تشریح شوي ترسره شوي.په لنډه توګه، د هرې کرښې لپاره، شپږ تخمونه په 3 مختلفو لوښو کې کرل شوي.د حاصل شوي تخمونو څخه، درې د یووالي پر بنسټ غوره شوي.هغه تخمونه چې غیر معمولي ښکاري یا د پام وړ لوړ یا د اکثریت په پرتله لنډ وو نه کارول شوي.د 3 ملي میتر قطر څلور پاڼی ډیسکونه د دریو مختلفو 15 ورځو پخوانیو بوټو د څلورم پاڼی له پراخې برخې څخه ایستل شوي.په هر پاڼی کې یو ډیسک له دوو بوټو څخه او دوه ډیسکونه د یو نبات څخه، د دویم ډیسک سره د اوبو کنټرول (لاندې وګورئ).ډیسکونه په انفرادي ډول په 50 μl H20 کې په تور 96-څاه پلیټ کې تیر شوي، د المونیم مهر سره مهر شوي ترڅو د رڼا سره مخ شي، او د شپې د خونې په حرارت کې ساتل شوي.بل سهار د عکس العمل حل د 2 mg/ml chemiluminescent probe L-012 (Wako, catalog # 120-04891)، 2 mg/ml هارسرریډش پراکسیډیس (ډول VI-A, Sigma-Aldrich, catalog # P6782) په کارولو سره رامینځته شو. 100 mg/ml Chitin یا 2 μM د Flg22.د دې عکس العمل 50 μl د څلورو څاګانو څخه دریو ته اضافه شوي.څلورم څاه یو جعلي کنټرول و، کوم چې د MAMP پرته د عکس العمل حل اضافه شوی و.په هر پلیټ کې څلور خالي څاګانې چې یوازې اوبه پکې شاملې وې.

د عکس العمل حل اضافه کولو وروسته، لمریزینس د SynergyTM 2 ملټي کشف مایکروپلیټ ریډر (BioTek) په کارولو سره په هر 2 دقیقو کې د 1 ساعت لپاره اندازه شوی.د پلیټ لوستونکی د دې 1 ساعت په جریان کې په هر 2 دقیقو کې د لمریزینس اندازه اخلي.د ټولو 31 لوستلو مجموعه د هرې څاه لپاره د ارزښت ورکولو لپاره محاسبه شوې.د هر جینټایپ لپاره د MAMP غبرګون لپاره اټکل شوی ارزښت په دې توګه محاسبه شوی و (د دریو تجربوي څاګانو په اوسط ډول د لمریز څاه ارزښت — د فرضي څاه ارزښت) - منفي د اوسط خالي څاه ارزښت.د خالي څاه ارزښتونه په دوامداره توګه صفر ته نږدې وو.

د پاڼی ډیسکنیکوتیانا بینتامیانا، یو لوړ ځواب ویونکی سورغم لاین (SC0003) ، او یو ټیټ ځواب ویونکی سورغم لاین (PI 6069) هم د کیفیت کنټرول موخو لپاره په هر 96 څاه پلیټ کې د کنټرول په توګه شامل شوي.

ب. کوکید انوکولم چمتو کول او واکسین کول

ب. کوکیinoculum چمتو شوی لکه څنګه چې مخکې تشریح شوی.په لنډه توګه، د جوار دانې د دریو ورځو لپاره په اوبو کې ډوب شوي، مینځل شوي، په 1L مخروطي فلاسکس کې اچول شوي او د یو ساعت لپاره په 15psi او 121 سانتي ګراد کې په اتوماتيک ډول پټ شوي.بیا دا دانه د 5 ملی لیتر میکریټ شوي مایسیلیا سره د تازه کلتور څخه په تیښته شوي.ب. کوکیLSLP18 جلا کوي او د خونې په حرارت کې د 2 اونیو لپاره پریږدي، په هرو 3 ورځو کې فلاسکونه ولړزوي.د 2 اونیو وروسته، د فنګس اخته سورغم دانې په هوا کې وچې شوې او بیا په 4 سانتي ګراد کې ذخیره شوي تر څو چې د کروندې د واکسین کولو پورې.ورته انوکولم د ټولې محاکمې لپاره کارول شوی و او هر کال تازه جوړ شوی و.د واکسین کولو لپاره، 6-10 اخته شوي حبوبات د 4-5 اونیو زاړه جوار بوټو کې ځای پرځای شوي.د دغو فنګسونو څخه تولید شوي تخمونه د یوې اونۍ په اوږدو کې د جوار په ځوانو بوټو کې انفیکشن پیل کړي.

د تخم چمتو کول

مخکې له دې چې په ځمکه کې د جوار تخم وکرل شي د فنګس وژونکي، حشره وژونکو او خوندي مخلوط سره درملنه وشي چې په کې ~ 1٪ Spirato 480 FS فنګس وژونکي، 4٪ Sebring 480 FS فنګس وژونکي، 3٪ Sorpro 940 ES د تخم سیفینر شامل دي.بیا تخمونه د 3 ورځو لپاره په هوا کې وچ شوي چې د تخمونو شاوخوا د دې مخلوط یو پتلی پوښ چمتو کوي.خوندي کونکي اجازه ورکړه چې د بوټو وژونکو ډبل میګنم کارولو څخه دمخه د درملنې په توګه.

د نښه شوي پاڼي د مقاومت ارزونه

SCP د جون په 14-15 2017 او 20 جون 2018 کې د کلیټون، NC په مرکزي فصلونو څیړنې سټیشن کې په تصادفي بشپړ بلاک ډیزاین کې په هره قضیه کې د دوه تجربوي نقلونو سره کرل شوی و.تجربې په 1.8 متر واحد قطارونو کې د 0.9 متر قطار عرض سره په هر پلاټ کې د 10 تخمونو په کارولو سره کرل شوي.دوه سرحدي قطارونه د هرې تجربې په شاوخوا کې کرل شوي ترڅو د څنډې اغیزو مخه ونیسي.تجربې د جولای په 20، 2017 او د 2018 کال د جولای په 20، په کوم ځای کې چې د جوار بوټي د ودې په 3 مرحله کې و. درجه بندي له یو څخه تر نهو ترازو پورې اخیستل شوي، چیرې چې هغه نباتات چې د ناروغۍ نښې نه لري په نهه او بشپړ ډول سره نمرې شوي. مړ شوي بوټي د یو په توګه ګومارل شويدوه درجه بندي په 2017 کې اخیستل شوي او په 2018 کې څلور لوستل هر کال د واکسین کولو دوه اونۍ وروسته پیل کیږي.sAUDPC (د ناروغۍ د پرمختګ وکر لاندې معیاري ساحه) محاسبه شوې لکه څنګه چې مخکې تشریح شوي.