د انتیلمینټیک درمل N,N-ډایتیل-m-ټولوامایډ (DEET د) راپور ورکړل شوی چې د ACHE (acetylcholinesterase) مخنیوی کوي او د ډیر رګونو د بندیدو له امله احتمالي سرطاني ځانګړتیاوې لري. پدې مقاله کې، موږ ښیې چې DEET په ځانګړي ډول د انډوتیلیل حجرو هڅوي چې انجیوجینیسیس ته وده ورکوي، په دې توګه د تومور وده زیاتوي. DEET د حجروي پروسې فعالوي چې د انجیوجینیسیس لامل کیږي، پشمول د تکثیر، مهاجرت، او چپکولو. دا د انډوتیلیل حجرو کې د NO تولید او VEGF څرګندولو زیاتوالي سره تړاو لري. د M3 خاموش کول یا د فارماسولوژیکي M3 مخنیوی کونکو کارول دا ټول اغیزې له منځه وړي، وړاندیز کوي چې د DEET لخوا هڅول شوي انجیوجینیسیس M3 حساس دی. هغه تجربې چې د انډوتیلیل او HEK حجرو کې د کلسیم سیګنالینګ سره تړاو لري چې د M3 ریسیپټرونو ډیر څرګندونه کوي، او همدارنګه د تړلو او ډاک کولو مطالعات، ښیي چې DEET د M3 ریسیپټرونو د الوسټریک ماډلیټر په توګه کار کوي. سربیره پردې، DEET د AChE مخنیوی کوي، په دې توګه د اسیتیلچولین بایو شتون او د M3 ریسیپټرونو سره د هغې تړل زیاتوي، او د الوسټریک تنظیم له لارې پروانګیوجینیټیک اغیزې لوړوي.
لومړني ECs د سویس موږکانو د شریان څخه جلا شوي وو. د استخراج طریقه د کوبایشي پروتوکول 26 څخه تطبیق شوې وه. د مورین ECs د EBM-2 په منځنی برخه کې کرل شوي وو چې د څلورمې برخې پورې د 5٪ تودوخې غیر فعال FBS سره ضمیمه شوي وو.
د HUVEC، U87MG، یا BF16F10 د تکثیر په اړه د DEET د دوو غلظتونو اغیز د CyQUANT حجرو د تکثیر ارزونې کټ (مالیکولر پروبونه، C7026) په کارولو سره تحلیل شو. په لنډه توګه، په هر څاه کې 5.103 حجرات په 96 څاه پلیټ کې تخم شوي وو، د شپې سره د نښلولو اجازه ورکړل شوه، او بیا د 24 ساعتونو لپاره د DEET سره درملنه وشوه. د ودې میډیم لرې کولو وروسته، د مایکروپلیټ هرې څاه ته د رنګ پابند محلول اضافه کړئ او حجرې د 30 دقیقو لپاره په 37 °C کې انکیوبیټ کړئ. د فلوروسینس کچه د میتراس LB940 ملټي موډ مایکروپلیټ ریډر (برتولډ ټیکنالوژیو، بد وائلډباد، جرمني) په کارولو سره ټاکل شوې وه چې د 485 nm اکسیټیشن فلټرونو او 530 nm اخراج فلټرونو سره سمبال شوي.
HUVEC په ۹۶ څاه پلیټونو کې د هر څاه د ۱۰۴ حجرو کثافت سره تخم شوي وو. حجرې د ۲۴ ساعتونو لپاره د DEET سره درملنه شوې وې. د حجرو وړتیا د کلوریمیټریک MTT ازموینې (سیګما-الډریچ، M5655) په کارولو سره ارزول شوې وه. د نظري کثافت ارزښتونه د څو موډ مایکروپلیټ لوستونکي (میتراس LB940) کې د ۵۷۰ nm طول موج سره ترلاسه شوي وو.
د DEET اغیزې د ان ویټرو انجیوجینیسیس ازموینو په کارولو سره مطالعه شوې. د 10-8 M یا 10-5 M DEET سره درملنه په HUVECs کې د کیپلیري اوږدوالي جوړښت زیات کړ (انځور 1a، b، سپینې بارونه). د کنټرول ګروپ سره پرتله کول، د DEET غلظت سره درملنه چې له 10-14 څخه تر 10-5 M پورې وه ښودلې چې د کیپلیري اوږدوالی په 10-8 M DEET کې یو پلیټو ته رسیدلی (ضمیمه انځور S2). د 10-8 M او 10-5 M غلظت حد کې د DEET سره درملنه شوي HUVECs د ان ویټرو پروانګیوجینک اغیز کې کوم مهم توپیر ونه موندل شو.
د نیوواسکولرائزیشن په اړه د DEET اغیزې د ټاکلو لپاره، موږ د ویوو نیوواسکولرائزیشن مطالعات ترسره کړل. د 14 ورځو وروسته، موږکانو چې د 10-8 M یا 10-5 M DEET سره پری کلچر شوي انډوتیلیل حجرو سره انجیکشن شوي د هیموګلوبین مینځپانګې کې د پام وړ زیاتوالی وښود (انځور 1c، سپینې بارونه).
سربیره پردې، د DEET-induced neovascularization په U87MG زینوګرافټ لرونکي موږکانو کې مطالعه شوې وه چې هره ورځ (ip) د DEET سره په هغه دوز کې انجیکشن شوي چې د 10-5 M پلازما غلظت هڅوي، کوم چې په ښکاره انسانانو کې نورمال دی. په 23 کې. د کشف وړ تومورونه (یعنې تومورونه> 100 mm3) په موږکانو کې د U87MG حجرو انجیکشن څخه 14 ورځې وروسته لیدل شوي. په 28 ورځ کې، د کنټرول موږکانو په پرتله د DEET-درملنې شوي موږکانو کې د تومور وده د پام وړ لوړه شوې وه (انځور 1d، مربع). سربیره پردې، د تومورونو CD31 رنګ کول وښودله چې DEET د پام وړ د کیپیلري ساحه زیاته کړه مګر د مایکرو ویسل کثافت نه. (انځور 1e-g).
د DETA- هڅول شوي تکثیر کې د عضلاتي ریسیپټرونو رول ټاکلو لپاره، د pFHHSiD (10-7 M، یو انتخابي M3 ریسیپټر ضد) په شتون کې 10-8 M یا 10-5 M DETA کارول شوی و. د HUVEC درملنه. pFHHSiD په ټولو غلظتونو کې د DETA د تکثیر ملکیتونه په بشپړ ډول بند کړل (جدول 1).
د دې شرایطو لاندې، موږ دا هم معاینه کړه چې ایا DEET به د HUVEC حجرو کې د کیپلیري اوږدوالی زیات کړي. په ورته ډول، pFHHSiD د DEET- هڅول شوي کیپلیري اوږدوالی (انځور 1a، b، خړ بارونه) د پام وړ مخنیوی وکړ. سربیره پردې، ورته تجربې د M3 siRNA سره ترسره شوې. که څه هم کنټرول siRNA د کیپلیري جوړښت هڅولو کې اغیزمن نه و، د M3 مسکرینیک ریسیپټر خاموش کول د کیپلیري اوږدوالی زیاتولو لپاره د DEET وړتیا له منځه یوړه (انځور 1a، b، تور بارونه).
سربیره پردې، د 10-8 M یا 10-5 M DEET- هڅول شوي واسکولرائزیشن ان ویټرو او نیوواسکولرائزیشن ان ویوو په بشپړ ډول د pFHHSiD لخوا بند شوي وو (انځور 1c، d، حلقې). دا پایلې ښیي چې DEET د انتخابي M3 ریسیپټر ضد یا M3 siRNA سره حساس لارې له لارې انجیوجینیسیس ته وده ورکوي.
ACHE د DEET مالیکولي هدف دی. درمل لکه ډونپیزیل، کوم چې د ACHE مخنیوی کونکي په توګه کار کوي، کولی شي په ویټرو او د موږک د غاړې د غړو اسکیمیا ماډلونو کې د EC انجیوجینیسیس هڅوي 14. موږ په HUVEC کې د ACHE انزایم فعالیت باندې د DEET دوه غلظت اغیز ازموینه وکړه. د DEET ټیټ (10-8 M) او لوړ (10-5 M) غلظت د کنټرول شرایطو په پرتله د انډوتیلیل ACHE فعالیت کم کړ (شکل 2).
د DEET دواړو غلظتونه (10-8 M او 10-5 M) په HUVEC کې د اسیتیلچولینسټریز فعالیت کم کړ. BW284c51 (10-5 M) د اسیتیلچولینسټریز مخنیوی کونکو لپاره د کنټرول په توګه کارول شوی و. پایلې د HUVEC کې د AChE فعالیت سلنه په توګه څرګندیږي چې د DEET دوه غلظت سره د موټر لخوا درملنه شوي حجرو په پرتله درملنه شوي. ارزښتونه د شپږو خپلواکو تجربو اوسط ± SEM په توګه څرګند شوي. *p < 0.05 د کنټرول په پرتله (کروسکل والیس او ډن څو ځله پرتله کولو ازموینه).
نایټریک اکسایډ (NO) د انجیوجینک پروسې 33 کې دخیل دی، له همدې امله، د DEET- هڅول شوي HUVECs کې د NO تولید مطالعه شوی. د DEET- درملنې شوي انډوتیلیل NO تولید د کنټرول حجرو په پرتله ډیر شوی، مګر یوازې د 10-8 M په دوز کې اهمیت ته رسیدلی (انځور 3c). د DEET- هڅول شوي NO تولید کنټرولونکي مالیکولي بدلونونو ټاکلو لپاره، د eNOS څرګندونه او فعالول د لویدیځ بلوټینګ لخوا تحلیل شوي. که څه هم د DEET درملنې د eNOS څرګندونه بدله نه کړه، دا د eNOS فاسفوریلیشن په خپل فعالولو سایټ (Ser-1177) کې د eNOS فاسفوریلیشن په پام وړ ډول زیات کړی پداسې حال کې چې د eNOS فاسفوریلیشن (انځور 3d) کې د غیر درملنې شوي حجرو په پرتله د هغې مخنیوی سایټ (Thr-495) کموي. سربیره پردې، د فعالولو سایټ او مخنیوي سایټ کې د فاسفوریلیشن شوي eNOS تناسب د انزایم ټول مقدار ته د فاسفوریلیشن شوي eNOS مقدار نورمال کولو وروسته محاسبه شو. دا تناسب د HUVECs کې د DEET د هر غلظت سره درملنه شوي د غیر درملنې شوي حجرو په پرتله د پام وړ لوړ شوی (انځور 3d).
په پای کې، د VEGF څرګندونه، چې یو له اصلي پروانګیوجینک عواملو څخه دی، د لویدیځ بلاټینګ لخوا تحلیل شوه. DEET د VEGF څرګندونه د پام وړ زیاته کړه، پداسې حال کې چې pFHHSiD دا څرګندونه په بشپړه توګه بنده کړه.
څرنګه چې د DEET اغیزې د فارماسولوژیکي بندیز او د M3 ریسیپټرونو د ښکته کولو لپاره حساس دي، موږ دا فرضیه ازموینه وکړه چې DEET ممکن د کلسیم سیګنالینګ ته وده ورکړي. په حیرانتیا سره، DEET د HUVEC (معلومات نه ښودل شوي) او HEK/M3 (انځور 4a، b) کې د کارول شوي دواړو غلظت لپاره د سایټوپلاسمیک کلسیم زیاتولو کې پاتې راغلی.
د پوسټ وخت: دسمبر-۳۰-۲۰۲۴